HITUNG TROMBOSIT

Metode untuk menghitung trombosit telah banyak dibuat dan jumlahnya tergantung dari kenyataan bahwa sukar untuk menghitung sel-sel trombosit yang merupakan partikel kecil dan mudah aglutinasi maupun mudah pecah. Sukar untuk membedakan dengan kuman. Metode elektronik mempunyai ketelitian yang baik, tetapi metode visual yang langsung cukup dapat digunakan utnuk menghitung trombosit yang rendah sampai tinggi. Bila trombosit rendah, maka metode yang menggunakan plasma cukup bermakna. Metode elektronik tidak akan diuraikan.Yang akan dibahas dalam halaman ini adalah penghitungan trombosit dengan metode langsung (Rees-Ecker).

a. Prinsip

Darah diencerkan ke dalam larutan yang mengandung brilliant cresyl blue, sehingga trombosit tercat biru muda. Trombosit dihitung dengan bilik hitung. Hasil pemeriksaannya diperiksa ulang dengan sediaan apus.

b. spesimen

Darah EDTA atau darh kapiler

c. Peralatan dan Pereaksi

• larutan pengencer trombosit (Rees-Ecker)
  
  
  
  • Natrium Sitrat 3,8 gr
  
  
  • brillian cresyl blue 0,1 gr
  
  
  • Formaldehid 40% 0,2 gr
  
  
  • Aquadest 100 ml
  
  
  • salinlah sebelum digunakan
  
  
  
  


• pipet eritrosit


• bilik hitung


• kaca Obyek, cat wright dan larutan penyangga fosfat


• mikroskop


• cawan petri


• kertas saring / tissue

d. Cara Kerja

hisaplah darah dengan pipet erotrosit sampai tanda 0,5 dan encerkan dengan larutan pengencer sampai tanda 101 (pengenceran 200x). Mulai saat ini trombosit harus selesai dihitung dalam waktu 30 menit, agar tidak terjadi disintegrasi sel-sel trombosit

kocoklah pipet tersebut 3-5 menit

bersihkan bilik hitung

siapkanlah cawan petri bagian dalam, dasar dan tutupnya ditempeli kapas yang ukurannya sama dan sebelumnya telah dibasahi air

setelah pipet tersebut dikocok, buanglah 4 tetes pertama dan tetesan ke lima isikan ke dalam bilik hitung. masukkan bilik hitung tersebut ke dalam cawan petri yang telah disiapkan tadi. Biarkan selama 15 menit , agar trombosit mengendap dan tidak terjadi penguapan.

letakkan bilik hitung di bawah mikroskop dengan perbesaran 100X obyektif dan kemudian perbesaran 40 x , trombosit tampak refraktif dan mengkilat berwarna biru muda / nila, lebih kecil dari eritrosit serta bentuk bulat, lonjong atau tersebar atau bergerombol.

perhitungan:

jumlah trombosit =

rata-rata jumlah trombosit tiap kotak X pengenceran volume kotak trombosit(kotak kecil)

buatlah sediaan apus dengan pewarnaan Wright dan amati kesan jumlah trombosit sebagai periksa ulang terhadap metode di atas

HITUNG JUMLAH RETIKULOSIT

Retikulosit adalah eritrosit muda yang sitoplasmanya mengandung sejumlah besar sisa-sisa ribosom dan RNA, dan berasal dari sisa inti dari bentuk penuh pendahulunya. Ribosom mempunyai kemampuan utnuk bereaksi dengan cat tertentu seperti briliant cresyl blue atau new methylene blue untuk membentuk endapan grnaula atau filament yang berwarna biru. Reaksi ini hanya terjadi pada pewarnaan terhadap sel yang masih hidup dan tidak difiksasi. Oleh karena itu disebut pewarnaan supravital. Retikulosit paling muda (imatur) adalah yang mengandung ribosom terbanyak. Sebaliknya retikulosit tertua hanya mempunyai beberapa titik rinosome. Banyak retikulosit dalam darah tepi menggambarkan aktivitas eritropoiesis yang hampir akurat. Hitung retikulosit dinyatakan sebagai prosentase jumlah retikulosit per 1000 eritrosit. Nilai normalnya 0,5 - 1,5 %.

a. Dasar

Darah dicampur dengan karutan brilliant cresyl blue atau larutan new methylene blue, lalu dibuat sediaan apus dan jumlah retikulositnya dihitung di bawah mikroskop. Jumlah retikulosit dihitung per 1000 eritrosit dan dinyatakan dalam %.

b. Peralatan dan Pereaksi

• pewarnaan retikulosit dapat dilakukan dengan salah satu cat berikut:
  
  
  
  • larutan new methylene blue :
    
    
    
    • Natrium Klorida 0,8 gr
    
    
    • Kalium Oxalate 1,4 gr
    
    
    • New methylen blue 0,5 gr
    
    
    • aquadest 100 ml
    
    
    
    
  
  
  • larutan brilliant cresyl blue :
    
    
    
    • brilliant cresyl blue 1,0 gr
    
    
    • Na sitrat 20 ml
    
    
    • Natrium Clorida 0,85% 80 ml
    
    
    
    
  
  
  
  


• saring kedua cat tersebut sebelum digunakan


• kaca obyek


• tabung reaksi kecil


• pipet pasteur atau tabung mikrohematokrit


• mikroskope

c. spesimen

darah kapiler , darah EDTA atau darah segar

d. Cara Kerja

• ke dalam tabung reaksi kecil tetskan 2btetes larutan brilliant cresyl blue dalam natrium citrat atau new methylene blue.


• tembahkan 4 tetes darah, campurkan baik-baik dan biarkan selama15 menit agar pewarnaan sempurna


• inkubasi 37 derajat Celcius selama 15 menit, tabung tersebut kocok sekali lagi dan ambil setetes dengan pipit pasteur untuk dibuatn sediaan darah apus. Keringkan di udara dan periksalah dengan mikroskop.


• periksalah dengan perbesaran obyektif 100 kali. Carilah daerah yang cukup tipis di mana eritrosit tidak membuat reuleaux. Eritrosit biru muda dan retikulasit akan tumpak sebagai sel yang mengandung granula / filament biru. Bila kurang jelas bisa di counterstain (dicat lagi) dengan cat wright


• hitung dalam 1000 eritrosit dengan mempersempit lapangan pandang (letakkan kertas dengan lubang di dalam okuler)

e. Perhitungan

jumlah retikulosit =

jumlah retulosit 1000 eritrosit

x 100 %

g. Nilai Normal Dacie ; 0,5 - 1,5 %

INDEKS ERITROSIT

MCV	Ht Jumlah eritrosit x 10	nilai normal 82 - 92 femtoliter
MCH	Hb Jumlah eritrosit x 10	nilai normal 27 - 32 pikogram
MCHC	Hb Ht x 100%	nilai normal 32 - 37 %

 

HEMATOKRIT

Nilai hematokrit adalah volume eritrosit yang dimampatkan (packed cell volume). Istilah lainnya nilai hematokrit adalah volume sel-sel eritrosit seluruhnya dalam 100ml darah dan dinyatakan dalam %. Berdasarkan atas reprodusibilitas dan sederhananya pemeriksaan tersebut merupakan salah satu pemeriksaan yang paling dapat dipercaya di antara parameter lainnya, yaitu kadar Hb dan hitung eritrosit. Dapat dipergunakan sebagai test penyaring sederhana terhadap anemia.

1. Prinsip Pemeriksaan

Darah dengan antikoagulan diputar di sentrifuge, kemudian dibandingkan panjang kolom merah dengan total kolom.

2. Metode Pemeriksaan

• mikrohematokrit > kapiler


• makrohematokrit > wintrobe

MIKROHEMATOKRIT

Penggunaan tabung hematokrit yang kapasitas dan diameternya lebih kecil dari tabung wintrobe sangat tepat untuk cara pemeriksaan rutin dalam klinik. Disamping itu tabung tersebut dapat dipergunakan untuk penampung darah kapiler secara langsung. Pada anemia makrositik terdapat sedikit kenaikan jumlah plasma, dengan adanya sferofit pada sferosiasis, thalasemia, anemia hipokromik dan anemia sel sabit kenaikan jumlah plasmanya lebih tinggi lagi.

a. Dasar

Darah EDTA atau heparin disentrifuge, sel-sel eritrositnya akan dimampatkan. Tingginya kolom eritrosit diukur dinyatakan dalam % darah tersebut.

b. Alat

• tabung kapiler hematokrit ukuran 75 mm, diameter 1 mm. Ada yang berisi heparin (khusus untuk darah kapiler) dan ada yang tidak berisi antikoagulan (untuk darah antikoagulan, misalnya darah EDTA)


• lampu spiritus / malam untuk menutup salah satu ujung tabung hematokrit


• sentrifuge yang dapat memutar > 16.000 rpm


• skala pembaca mikrohematokrit

c. Reagensia

Heparin (sudah melapisi lumen tabung kapiler)

d. Bahan

Darah vena / darah kapiler

e. Cara Kerja

bila menggunakan darah kapiler

• lakukan pengambilan darah kailer


• isi tabung kapiler dengan darah sampai 3/4 tabung


• sumbat dengan malam ujung tabung yang ada darahnya atau bakar ujung tabung yang tidak ada darahnya (tabung yang kosong) dengan lampu spiritus, hingga benar-benar tertutup.


• sentrifuge dengan kecepatan 16.000 rpm selama 5 menit


• baca dengan skala hematokrit panjang kolom merah


• bila tidak mempunyai skala Ht dipakai perhitungan

Ht =

panjang kolom merah panjang total kolom

x 100%

f. Keuntungan Mikrohematokrit

• cepat


• kesalahan lebih kecil


• mudah


• darah sedikit

g. Sumber Kesalahan

• sentrifugasi tidak benar


• lupa mengocok sample


• penutupan ujung kapiler tidak rapat


• tabung kapiler tidak ditera

MAKROHEMATOKRIT

a. Dasar

Darah antikoagulan disentrifuge pada kecepatan tertentu dan dalam waktu tertentu, perbandingan volume eritrosit terhadap volume specimen darah dinyatakan dalam %

b. Alat

• tabung wintrobe dengan diameter 2,5 - 3,0 mm, panjang 110 mm dan berskala 0 - 10 mm dengan skala terkecil 1 mm. Volumenya 1 ml darah EDAT


• alat sentrifuge

c. Bahan

Darah EDTA, darah heparin

d. Cara Kerja

• dengan menggunakan pipet Pastuer yang berisi darah EDTA, masukan ujung pipet sampai dasar tabung wintrobe


• sambil diangkat, pelan-pelan keluarkan isinya sampai skala teratas


• sentrifuge tabung tersebut pada 3000 rpm selama 30 menit


• tingginya kolom eritrosit adalah nilai hematokrit yang dinyatakan dalam %

e. Nilai Normal

• pria : 47 +/- 7 %


• wanita : 42 +/- 5 %


• Bayi baru lahir : 54 +/- 10 %


• bayi 3 bulan : 38 +/- 6 %


• bayi 3-6 tahun : 40 +/- 4 %


• 10 - 12 tahun : 41 +/- 4 %

 

HITUNG JUMLAH ERITROSIT

Seperti hitung jumlah leukosit, untuk menghitung jumlah sel-sel eritrosit ada 2 metode, yaitu metode manual dan elektronik. Metode manual hampir sama dengan hitung leukosit.

a. Dasar

Untuk memudahkan menghitung eritrosit dan mencegah hemolisis, darah diencerkan dalam larutan isotonis, yang menghancurkan sel-sel lain selain eritrosit.

b. Alat

• alat untuk mengambil darah kapiler atau darah vena


• hemositometer
  
  
  
  • bilik hitung
  
  
  • kaca penutup
  
  
  • pipet eritrosit
    
    
    
    • pipet dengan bola merah
    
    
    • dengan skala 0,5 - 1 - 101
    
    
    
    
  
  
  
  


• mikroskop

c. Reagensia

Larutan hayem yang terdiri atas :

• Na2SO4 kristal 5 gram


• NaCl 1 gram


• HgCl2 0,5 gram


• Aquadest 200 ml

d. Cara Kerja

• Bilik hitung yang telah ditutup dengan kaca penutup diletakkan di mikroskop. Cari kotak kecil (bila menggunakan Neubauer Improve ada di tengah)


• dengan pipet eritrosit pipet darah sampai angka 1 (pengenceran 100x), atau sampai angka 0,5 (pengenceran 200x). Bersihkan ujung pipet.


• pertahankan posisi pipet, hisap larutan hayem sampai angka 101


• bersihkan ujung pipet


• kocok secara horisontal (searah)


• buang tiga tetes pertama


• teteskan ke bilik hitung lewat sela-sela kaca penutup

e. Perhitungan

jumlah eritrosit =

rata-rata jumlah eritrosit X pengenceran volume kotak kecil

f. Nilai Normal

• Pria Dewasa : 4,5 - 6,5 juta / mm3


• wanita dewasa : 3,9 - 5,6 juta / mm3


• bayi < 3 bln : 4,0 - 5,6 juta / mm3


• bayi 3 bulan : 3,2 - 4,5 juta / mm3


• bayi 1 tahun : 3,6 - 5,0 juta / mm3


• anak 12 tahun : 4,2 - 5,2 juta / mm3

LAJU ENDAP DARAH

Kecepatan endap darah atau laju endap darah adalah mengukur kecepatan sedimentasi sel eritrosit di dalam plasma. Satuannya mm/jam. Cara pemeriksaan yang mendapat reomendasi dari International Committee for Standarization in Hematology (ACSH) adalah cara westergen. KED berlangsung dalam 3 tahap. Tahap pertama terdapat penyusunan letak sel-sel eritrosit (reloux formation) dimana kecepatan sedimentasi sangat sedikit. Tahap kedua kecepatan sedimentasi agak cepat dan tahap ketiga kecepatannya sangat rendah.

1. Macam Pemeriksaan Laju Endap Darah

• westergen


• wintrobe. juga dapat mengukur hematokrit sekaligus.


• cutler


• hellige vollmer. Menggunakan darah kapiler

2. Prinsip Pemeriksaan

apabila sejumlah darah diberi antikoagulan diletakkan dalam tabung gelas dalam posisi tegak lurus maka sel-sel akan mengendap, sebaliknya plasma akan bergerak ke atas. Hal ini oleh karena perbedaan berat jenis.

HITUNG JENIS LEUKOSIT

Hitung jenis leukosit dilakukan untuk menetapkan prosentase jenis leukosit yang ada di dalam darah. Pada waktu yang sama juga dilakukan pemeriksaan eritrosit, leukosit, dan trombosit. Di samping itu juga dibuat taksiran kasar terhadap leukosit dan trombosit. Dari pemeriksaan sediaan apus dapat digunakan untuk menaksir kandungan hemoglobin, ukuran, bentuk, dan struktur eritrosit. Hitung jenis leukosit biasanya dilakukan pada sediaan apus yang dibuat pada kaca obyek dengan pewarnaan tertentu. Karena itu perlu diuraikan pembuatan sediaan apus, cara mewarnai serta pemeriksaan dan melaporkan hasil.

1. Alat

• kaca benda / obyek glass yang bersigh


• spreader / penggeser


• pipet darah dan pengaduk


• bak pengecatan


• bak pengeringan


• timer


• gelas ukur

2. Reagensia

• cat rowmanowsky


• wright


• leisman


• may grunwald


• giemsa(induk)


• buffered distilled water pH 7,2 untuk melarutkan cat (buffer sorensen)


• methanol 90%

3. Bahan

Darah vena dan darah kapiler

4. Cara membuat preparat darah hapus

• ambil kaca benda yang bersih, letakan 1 tetes darah disisi kanan


• sentuh tetetsan darah dengan spreader, darah akan melebar sepanjang spreader


• dorong spreader ke arah kiri dengan sudut 45 derajat, keringkan


• amati preparat baik bila : tipis, rata, tidak terputus-putus, ekor tidak boleh robek


• preparat yang sudah kering, genangi dengan methanol 90%, selama 10 menit (beberapa buku menyebutkan cukup 2-3 menit)


• buat larutan giemsa dari giemsa induk dan buffer sorensen dengan perbandingan giemsa 1 bagian, buffer 9 bagian


• preparat yang telah difixasi methanol digenangi larutan giemsa selama 15 menit


• cuci dengan air yang mengalir


• keringkan di udara


• setelah kering dapat diolesi lacquer

5. Rapid Staining

Dalam beberapa keadaan tergesa-gesa kita membutuhkan preparat dalam waktu cepat, dengan rapid staining hal ini dapat dipenuhi. Cara:

• fixasi methanol 90% selama 2-3 menit


• cuci air


• baca dalam keadaan basah.